玉屏風(fēng)口服液沉淀問(wèn)題初探
【處方】黃芪600g  防風(fēng)200g  白術(shù)（炒）200g
【制法】以上三味, 將防風(fēng)酌予碎斷, 提取揮發(fā)油, 蒸餾后的水溶液另器收集；藥渣及其余黃芪等二味加水煎煮兩次, 第一次1.5小時(shí), 第二次1小時(shí), 合并煎液, 濾過(guò), 濾液濃縮至適量, 加適量乙醇使沉淀, 取上清液減壓回收乙醇, 加水?dāng)噭? 靜置, 取上清液濾過(guò), 濾液濃縮。取蔗糖400g制成糖漿, 與上述藥液合并, 再加入揮發(fā)油及蒸餾后的水溶液, 調(diào)整總量至1000ml, 攪勻, 濾過(guò), 灌裝, 滅菌, 即得。
【含量測(cè)定】本品每1ml含黃芪以黃芪甲苷（C41H68O14）計(jì), 不得少于0.12mg。
【相對(duì)密度】1.16
研究目的：微粒沉降需要達(dá)到一定的粒徑范圍，大微粒優(yōu)先聚集或者大微粒比小微粒聚集快，因此，大微粒先沉降，小微粒后沉降。醇沉過(guò)程中一部分沉淀是多糖和蛋白質(zhì)相互作用形成的, 而一些在水中難溶的、極性較小的成分易被包裹于沉淀中。醇沉過(guò)程中隨著乙醇濃度升高, 有兩種力同時(shí)起作用, 一是大量多糖蛋白質(zhì)受重力影響沉降, 隨之而來(lái)的是大量的小分子物質(zhì)被沉淀包裹。同時(shí), 隨著外界極性減小以及作用力的變化, 藥物有趨勢(shì)重新分配到水醇溶劑體系當(dāng)中, 進(jìn)而提高口服液有效成分含量。醇沉的影響是雙向的，高濃度乙醇對(duì)黃芪甲苷溶解性好，而經(jīng)過(guò)后續(xù)濃縮和水沉工藝，乙醇濃度下降，原來(lái)在高濃度乙醇當(dāng)中溶解的黃芪甲苷變?yōu)椴蝗芏恋?，然后過(guò)濾除去，因此醇沉最佳工藝得到的參數(shù)并不代表黃芪甲苷損失最少。此外，若黃芪甲苷保留率高，則應(yīng)盡可能除去大分子多糖，保留小分子多糖。因?yàn)樽罱K是想提高整個(gè)灌裝口服液瓶當(dāng)中的黃芪甲苷含量，黃芪甲苷的損失都計(jì)入到這個(gè)醇沉工藝的優(yōu)劣，不能簡(jiǎn)單的只看醇沉的工藝。采用逆工藝路線，考察滅菌、過(guò)濾、水沉、醇沉對(duì)黃芪甲苷損失率及沉淀現(xiàn)象的影響，從而得出最佳工藝，旨在保留黃芪甲苷的同時(shí)去除沉淀。
一、樣品制備：黃芪240g， 防風(fēng)80g ，白術(shù)（炒）80g，將防風(fēng)酌予碎斷，提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液另器收集；藥渣及其余黃芪等二味加水煎煮兩次，第一次1.5h，第二次1h，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至300ml， 藥液密度1.18g/ml，以1ml/min的乙醇加入速度加95%乙醇至藥液含醇量分別為10%、20%、30%、40%、50%，后續(xù)步驟根據(jù)工藝進(jìn)行，觀察各時(shí)間節(jié)點(diǎn)藥液性狀。原工藝采用中速濾紙與0.65umPP濾膜兩級(jí)過(guò)濾，研究過(guò)程采用SCP-332（0.8um）與SCP-334（0.45um）過(guò)濾紙板兩級(jí)過(guò)濾。
二、滅菌對(duì)玉屏風(fēng)口服液鞣質(zhì)含量的影響
滅菌條件  鞣質(zhì)含量 平均值 標(biāo)準(zhǔn)偏差 RSD
滅菌前
6.444 5.791 5.921 6.052 0.346 5.71%
115℃,32min 29.319 43.044 28.927 33.763 8.040 23.81%
118℃,16min -3.229 -5.712 -1.791 -3.577 1.984 -55.46%
121℃,8min 20.430 18.470 20.169 19.690 1.065 5.41%
分析：滅菌后115℃，121℃鞣質(zhì)含量均增加，118℃鞣質(zhì)含量減少
三、滅菌對(duì)玉屏風(fēng)口服液穩(wěn)定性的影響
滅菌條件  zeta電位值 平均值 標(biāo)準(zhǔn)偏差 RSD
未滅菌 0 -0.1 -0.1 -0.217 0.172 -79.50%
121℃，8min -0.1 -0.2 -0.1 -0.133 0.058 -43.30%
118℃,16min -0.3 -0.4 -0.3 -0.333 0.058 -17.32%
115℃,8min -0.2 -0.7 -0.1 -0.250 0.295 -117.98%
分析：118℃，16min，體系較為穩(wěn)定。
四、不同醇濃度對(duì)沉淀量的影響不同含醇量的現(xiàn)象觀察：見下圖
  
加入乙醇的過(guò)程中，當(dāng)含醇量達(dá)到40%時(shí)，出現(xiàn)明顯沉淀，而50%時(shí)出現(xiàn)明顯分層。
分析：取樣都是上清液，原液的微粒多且密集，大部分都為小微粒。醇含量10%-40%時(shí)，顯微鏡中的微粒并未明顯變化，含醇量40%時(shí)，現(xiàn)象觀察藥液上層出現(xiàn)少量黑色漂浮物。含醇量50%時(shí)，出現(xiàn)明顯分層，而顯微鏡中微粒也很少，顯微鏡觀察與現(xiàn)象觀察情況相符合。
見下圖
五、總結(jié)
通過(guò)基礎(chǔ)研究，由此可以得出以下結(jié)論：
1、滅菌溫度與與滅菌時(shí)間對(duì)口服液沉淀影響較大，在118℃，16min，體系相對(duì)比較穩(wěn)定且鞣質(zhì)較少。
2、含醇量在50%，體系沉淀較多且出現(xiàn)明顯分層狀態(tài)，后續(xù)對(duì)60-70-80%濃度實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。
3、過(guò)濾材料及孔徑的不同，對(duì)于體系內(nèi)粒子數(shù)量的減少也不同，對(duì)體系穩(wěn)定性也不同。
4、整體實(shí)驗(yàn)的進(jìn)展對(duì)于沉淀量有明顯的減少，但未經(jīng)過(guò)中試驗(yàn)證。
注：對(duì)于其他影響因素，ph，過(guò)濾溫度，高濃度醇影響，間歇滅菌，其他過(guò)濾方式，揮發(fā)油添加的影響等因素，后續(xù)在實(shí)驗(yàn)中會(huì)繼續(xù)探究。